Producción de Factor de Crecimiento Epidermal Humano (hEGF) por métodos recombinantes
Fecha
2024
Autores
González Santos, Andrés Felipe
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Editor
Universidad EAFIT
Resumen
Human Epidermal Growth Factor (hEGF) is a protein naturally produced by skin cells and essential in wound healing and tissue regeneration. In this study, the production of recombinant hEGF was carried out using Escherichia coli as the expression model. The hEGF gene was cloned into the pET32a vector and initially transformed into E. coli XL1-Blue for its amplification. Subsequently, the purified plasmid was used to transform E. coli BL21, a strain optimized for recombinant protein expression. hEGF expression was induced with 1 mM IPTG (Isopropyl ß-D-1-thiogalactopyranoside) at 16 °C for 16 hours, conditions that favored obtaining the protein in soluble form. Purification was performed through a two-stage process: nickel a inity chromatography (Ni-NTA) followed by anion exchange chromatography. The identity and purity of the protein were confirmed by performing acrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot based on the use of anti-His antibodies. This protocol allowed obtaining recombinant hEGF in its soluble and active form, establishing an e icient methodology for its production at a laboratory scale.
Descripción
El Factor de Crecimiento Epidermal humano (hEGF) es una proteína que se produce naturalmente por las células de la piel y es de gran importancia en procesos de cicatrización y regeneración tisular. En este estudio, se lleva a cabo la producción de hEGF recombinante utilizando el modelo de expresión de Escherichia coli. El gen hEGF se clonó en el vector pET32a, y se usó para transformar células E. coli XL1-Blue y así amplificar el plásmido. Posteriormente, el plásmido purificado se utilizó para transformar E. coli BL21, una cepa optimizada para la expresión de proteínas recombinantes. La expresión de hEGF se indujo con IPTG (Isopropil ß-D-1-thiogalactopyranoside) 1 mM a 16 °C durante 16 horas, condiciones que favorecieron la obtención de la proteína en forma soluble. La purificación se realizó mediante un proceso de dos etapas: cromatografía de afinidad con níquel (Ni-NTA) seguida de cromatografía de intercambio aniónico. La identidad y pureza de la proteína se confirmaron por geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) y Western blot usando anticuerpos anti-His. Este protocolo permitió la obtención de hEGF recombinante en su forma soluble y activa, estableciendo una metodología eficiente para su producción a escala de laboratorio.