Producción de Factor de Crecimiento Epidermal Humano (hEGF) por métodos recombinantes

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dc.contributor.advisorCorrales García, Ligia Luz
dc.contributor.authorGonzález Santos, Andrés Felipe
dc.coverage.spatialMedellín de: Lat: 06 15 00 N degrees minutes Lat: 6.2500 decimal degrees Long: 075 36 00 W degrees minutes Long: -75.6000 decimal degreeseng
dc.creator.degreeBiólogo(a)spa
dc.creator.emailandifeli96@hotmail.com
dc.date.accessioned2025-06-27T16:14:26Z
dc.date.available2025-06-27T16:14:26Z
dc.date.issued2024
dc.descriptionEl Factor de Crecimiento Epidermal humano (hEGF) es una proteína que se produce naturalmente por las células de la piel y es de gran importancia en procesos de cicatrización y regeneración tisular. En este estudio, se lleva a cabo la producción de hEGF recombinante utilizando el modelo de expresión de Escherichia coli. El gen hEGF se clonó en el vector pET32a, y se usó para transformar células E. coli XL1-Blue y así amplificar el plásmido. Posteriormente, el plásmido purificado se utilizó para transformar E. coli BL21, una cepa optimizada para la expresión de proteínas recombinantes. La expresión de hEGF se indujo con IPTG (Isopropil ß-D-1-thiogalactopyranoside) 1 mM a 16 °C durante 16 horas, condiciones que favorecieron la obtención de la proteína en forma soluble. La purificación se realizó mediante un proceso de dos etapas: cromatografía de afinidad con níquel (Ni-NTA) seguida de cromatografía de intercambio aniónico. La identidad y pureza de la proteína se confirmaron por geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) y Western blot usando anticuerpos anti-His. Este protocolo permitió la obtención de hEGF recombinante en su forma soluble y activa, estableciendo una metodología eficiente para su producción a escala de laboratorio.
dc.description.abstractHuman Epidermal Growth Factor (hEGF) is a protein naturally produced by skin cells and essential in wound healing and tissue regeneration. In this study, the production of recombinant hEGF was carried out using Escherichia coli as the expression model. The hEGF gene was cloned into the pET32a vector and initially transformed into E. coli XL1-Blue for its amplification. Subsequently, the purified plasmid was used to transform E. coli BL21, a strain optimized for recombinant protein expression. hEGF expression was induced with 1 mM IPTG (Isopropyl ß-D-1-thiogalactopyranoside) at 16 °C for 16 hours, conditions that favored obtaining the protein in soluble form. Purification was performed through a two-stage process: nickel a inity chromatography (Ni-NTA) followed by anion exchange chromatography. The identity and purity of the protein were confirmed by performing acrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot based on the use of anti-His antibodies. This protocol allowed obtaining recombinant hEGF in its soluble and active form, establishing an e icient methodology for its production at a laboratory scale.
dc.formatapplication/pdfeng
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/10784/36279
dc.language.isospaspa
dc.publisherUniversidad EAFITspa
dc.publisher.departmentEscuela de Ciencias Aplicadas e Ingeniería. Departamento de Ciencias Biológi​c​asspa
dc.publisher.placeMedellín
dc.publisher.programBiologíaspa
dc.rightsTodos los derechos reservadosspa
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccess
dc.rights.localAcceso cerrado
dc.subjectFactor de Crecimiento Epidermal humano (hEGF)
dc.subjectProteínas recombinantes
dc.subjectEscherichia coli
dc.subjectPurificación de proteínas
dc.subjectVector pET32a
dc.subjectCromatografía de afinidad
dc.subjectProteínas heterólogas
dc.subject.lembAGENTES DERMATOLÓGICOS
dc.subject.lembBIOLOGÍA - CASO DE ESTUDIO
dc.subject.lembCELULAS - DESARROLLO
dc.titleProducción de Factor de Crecimiento Epidermal Humano (hEGF) por métodos recombinantes
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesiseng
dc.typebachelorThesiseng
dc.type.hasVersionacceptedVersioneng
dc.type.localTrabajo de gradospa
dc.type.spaArtículo

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