Examinando por Materia "Bacillus subtilis"
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Ítem Antimycotic activity of fengycin C biosurfactant and its interaction with phosphatidylcholine model membranes(ELSEVIER SCIENCE BV, 2017-08-01) González-Jaramillo LM; Aranda FJ; Teruel JA; Villegas-Escobar V; Ortiz A; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Lipopeptide biosurfactants constitute one of the most promising groups of compounds for the treatment and prevention of fungal diseases in plants. Bacillus subtilis strain EA-CB0015 produces iturin A, fengycin C and surfactin and it has been proven useful for the treatment of black Sigatoka disease in banana plants, an important pathology caused by the fungus Mycosphaerella fijiensis (Morelet). We have found that B. subtilis EA-CB0015 cell free supernatants and purified fractions inhibit M. fijiensis cellular growth. The effect of the purified lipopeptides mentioned above on fungal growth has been also evaluated, observing that iturin A and fengycin C inhibit mycelial growth and ascospore germination, whereas surfactin is not effective. On the hypothesis that the antifungal action of the lipopeptides is associated to their incorporation into biological membranes, ultimately leading to membrane permeabilization, a detailed biophysical study on the interaction of a new isoform of fengycin C with model dipalmitoyphosphatidylcholine (DPPC) membranes has been carried out. Differential scanning calorimetry shows that fengycin C alters the thermotropic phase transitions of DPPC, and is laterally segregated in the fluid bilayer forming domains. Fluorescent probe polarization measurements show that fengycin C does not affect the hydrophobic interior of the membrane. This latter perturbation is concomitant with a strong dehydration of the polar region of DPPC, as shown by FTIR. Fengycin-rich domains, where the surrounding DPPC molecules are highly dehydrated, may well constitute sites of membrane permeabilization leading to a leaky target membrane. These results are a solid support to explain the membrane perturbing action of fengycin, which has been related to its antifungal activity. (C) 2017 Elsevier B.V. All rights reserved.Ítem Aplicación de la metodología ZERI en la producción de proteasas alcalinas de Bacillus sp.(Universidad EAFIT, 2003) Giraldo Estrada, Catalina; Sáez Vega, Alex Armando; Montoya Campuzano, Olga Inés; Universidad EAFIT; Universidad Nacional de ColombiaÍtem Bacillus subtilis EA-CB0575 genome reveals clues for plant growth promotion and potential for sustainable agriculture(Springer, 2020-01-01) Franco-Sierra, N.D.; Posada, L.F.; Santa-María, G.; Romero-Tabarez, M.; Villegas-Escobar, V.; Álvarez, J.C.; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Bacillus subtilis is a remarkably diverse bacterial species that displays many ecological functions. Given its genomic diversity, the strain Bacillus subtilis EA-CB0575, isolated from the rhizosphere of a banana plant, was sequenced and assembled to determine the genomic potential associated with its plant growth promotion potential. The genome was sequenced by Illumina technology and assembled using Velvet 1.2.10, resulting in a whole genome of 4.09 Mb with 4332 genes. Genes involved in the production of indoles, siderophores, lipopeptides, volatile compounds, phytase, bacilibactin, and nitrogenase were predicted by gene annotation or by metabolic pathway prediction by RAST. These potential traits were determined using in vitro biochemical tests, finding that B. subtilis EA-CB0575 produces two families of lipopeptides (surfactin and fengycin), solubilizes phosphate, fixes nitrogen, and produces indole and siderophores compounds. Finally, strain EA-CB0575 increased 34.60% the total dry weight (TDW) of tomato plants with respect to non-inoculated plants at greenhouse level. These results suggest that the identification of strain-specific genes and predicted metabolic pathways might explain the strain potential to promote plant growth by several mechanisms of action, accelerating the development of plant biostimulants for sustainable agricultural. © 2020, Springer-Verlag GmbH Germany, part of Springer Nature.Ítem Construction of probe of the plant growth-promoting bacteria Bacillus subtilis useful for fluorescence in situ hybridization(Elsevier, 2016-09-01) Posada, L.F.; Alvarez, J.C.; Hu, C.-H.; de-Bashan, L.E.; Bashan, Y.; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Strains of Bacillus subtilis are plant growth-promoting bacteria (PGPB) of many crops and are used as inoculants. PGPB colonization is an important trait for success of a PGPB on plants. A specific probe, based on the 16 s rRNA of Bacillus subtilis, was designed and evaluated to distinguishing, by fluorescence in situ hybridization (FISH), between this species and the closely related Bacillus amyloliquefaciens. The selected target for the probe was between nucleotides 465 and 483 of the gene, where three different nucleotides can be identified. The designed probe successfully hybridized with several strains of Bacillus subtilis, but failed to hybridize not only with B. amyloliquefaciens, but also with other strains such as Bacillus altitudinis, Bacillus cereus, Bacillus gibsonii, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus; and with the external phylogenetic strains Azospirillum brasilense Cd, Micrococcus sp. and Paenibacillus sp. The results showed the specificity of this molecular probe for B. subtilis. (C) 2016 Elsevier B.V. All rights reserved.Ítem Effect of medium components and culture conditions in Bacillus subtilis EA-CB0575 spore production(Springer Berlin Heidelberg, 2015-10-01) Posada-Uribe, Luisa F.; Romero-Tabarez, Magally; Villegas-Escobar, Valeska; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Bacillus subtilis spores have important biotechnological applications; however, achieving both, high spore cell densities and sporulation efficiencies in fermentation, is poorly reported. In this study, medium components and culture conditions were optimized with different statistical methods to increase spore production of the plant growth promoting rhizobacteria B. subtilis EA-CB0575. Key medium components were determined with Plackett-Burman (PB) design, and the optimum concentration levels of two components (glucose, MgSO4·7H2O) were optimized with a full factorial and central composite design, achieving 1.37 × 10(9) CFU/mL of spore cell density and 93.5 % of sporulation efficiency in shake flask. The optimized medium was used to determine the effect of culture conditions on spore production at bioreactor level, finding that maintaining pH control did not affect significantly spore production, while the interaction of agitation and aeration rates had a significant effect on spore cell density. The overall optimization generated a 17.2-fold increase in spore cell density (8.78 × 10(9) CFU/mL) and 1.9-fold increase in sporulation efficiency (94.2 %) compared to that of PB design. These results indicate the potential of B. subtilis EA-CB0575 to produce both, high spore cell densities and sporulation efficiencies, with very low nutrient requirements and short incubation period which can represent savings of process production.Ítem Effective control of black Sigatoka disease using a microbial fungicide based on Bacillus subtilis EA-CB0015 culture(Academic Press Inc., 2015-08-01) Gutierrez-Monsalve, J.A.; Mosquera, S.; González-Jaramillo, L.M.; Mira, J.J.; Villegas-Escobar, V.; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Black Sigatoka disease caused by the fungus Mycosphaerella fijiensis Morelet is the most devastating disease of bananas worldwide. Its management is reliant on protectant and systemic fungicides despite their environmental concerns. This study evaluated the effect of a microbial fungicide (MF) based on Bacillus subtilis EA-CB0015 and its metabolites for the control of black Sigatoka disease on banana plants in greenhouse and field conditions. The MF applied at 1.5. L/ha and 3.0. L/ha provided control of the disease comparable to the protectant fungicide chlorothalonil in greenhouse. In the field, the MF applied in solution with water at 0.15. L/ha and 1.5. L/ha every 11. days during 10. weeks reduced black Sigatoka disease severity in 20.2% and 28.1% respectively; reductions comparable to those obtained with the protectant fungicides chlorothalonil (1.5. L/ha) and mancozeb (3.8. L/ha). The MF incorporated into different programs with systemic fungicides reduced disease level up to 42.9% with no significant differences with the conventional program. To determine which component of the MF is responsible for the activity against M. fijiensis, greenhouse and in vitro tests were set up to evaluate individually the spores, vegetative cells and secondary metabolites of B. subtilis EA-CB0015. All components reduced the severity of the disease and the germination of ascospores. For both trials the activity of the metabolites was higher and comparable to the activity obtained with the MF, indicating that the efficacy of the MF depends mainly on the metabolites and in lesser extent to B. subtilis EA-CB0015 cells. © 2015 Elsevier Inc.Ítem Enhanced molecular visualization of root colonization and growth promotion by Bacillus subtilis EA-CB0575 in different growth systems(Elsevier GmbH, 2018-01-01) Posada, L.F.; Álvarez, J.C.; Romero-Tabarez, M.; de-Bashan, L.; Villegas-Escobar, V.; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Bacillus subtilis EA-CB0575 is a plant growth-promoting bacterium (PGPB) associated with banana and tomato crops. Root colonization is an important trait for PGPB microorganisms and potentiates the bacterial effect related to the mechanisms of plant growth promotion. Therefore, detection of bacterial colonization of roots in different culture systems is important in the study of plant–microorganism interactions. In this study, fluorescent in situ hybridization (FISH) and catalyzed reporter deposition–FISH (CARD–FISH) were evaluated to determine the colonization ability of B. subtilis EA-CB0575 on banana and tomato roots planted on solid and liquid Murashige and Skoog medium (MS(S) and MS(L), respectively) and in soil for tomato plants. Results showed B. subtilis colonization 0–30 days post inoculation for banana and tomato plants in different culture systems with differential distribution of bacterial cells along tomato and banana roots. FISH and CARD–FISH methodologies were both successful in detecting B. subtilis colonies, but CARD–FISH proved to be superior due to its enhanced fluorescence signal. The presence of bacteria correlated with the promotion of plant growth in both plant species, providing clues to relate rhizospheric colonization with improvement in plant growth. FISH and CARD–FISH analysis results suggested the presence of native microbiota on the roots of in vitro banana plants, but not on those of tomato plants. © 2018 Elsevier GmbHÍtem Evaluación de factores ambientales simulados sobre el desempeño de formulados de Bacillus subtilis EA-CB0015 y su potencial como controlador biológico de la Sigatoka negra(Universidad EAFIT, 2011) Gutiérrez Monsalve, Jaime Andrés; Mosquera López, SandraLa Sigatoka negra causada por el hongo Mycosphaerella fijiensis es la enfermedad más devastadora del cultivo de banano y plátano alrededor del mundo -- Hasta el momento el control químico ha demostrado ser la técnica más eficaz, sin embargo esto ha generado problemas ambientales y económicos que han llevado al desarrollo de otras técnicas como el empleo de formulaciones biológicas -- En este trabajo se evaluó el desempeño de dos formulaciones de Bacillus subtilis EA-CB0015, una mezcla base agua, una emulsión y la suspensión bacteriana -- En relación al control de la enfermedad, el bioformulado que presentó los mejores resultados fue la mezcla base agua: a nivel in-vitro la formulación mezcla base agua inhibió el tubo germinativo de ascosporas de M. fijiensis un 66,1% sin presentar diferencias significativas con los controles químico y biológico; a nivel de invernadero la mezcla agua fue la única formulación que presentó control sobre la enfermedad con un porcentaje de área necrosada de 2,29%, sin presentar diferencias significativas con el 1,0 % mostrado por el control químico Dithane® -- Se evaluó la viabilidad de los bioformulados al ser sometidos a diversas condiciones ambientales: En relación a la viabilidad de las esporas de B. subtilis EA-CB0015 tras almacenar las formulaciones por 6 meses a 4°C y 25°C se encontró que a 25°C todas perdían entre un 47 a un 49% de la viabilidad sin presentar diferencias significativas entre ellas; mientras que a 4°C prácticamente no se presentó pérdida significativa de la viabilidad -- Para la tolerancia de las bioformulaciones a la radiación U.V., la emulsión fue el que más protegió a las esporas de B. subtilis EA-CB0015 con un td50 de 37,39 minutos, esto comparado a la mezcla base agua con un td50 de 7,77 minutos y a la suspensión bacteriana con un td50 de 6,67 minutos -- Ninguna de las formulaciones evaluadas igualó al control biológico Rhapsody®, el cual mostró un td50 mayor que 180 minutos y una reducción total de 24,1% en 180 min -- Con relación a la tolerancia a las mezclas de fungicidas se encontró que los bioformulados eran altamente tolerantes, la formulación mezcla base agua mostró un td50 mayor a 25 horas para todas las mezclas evaluadas y la suspensión bacteriana un td50 > 25 horas para 5 de las 8 mezclas evaluadas -- Por último se evaluó el lavado con lluvia, allí la emulsión presentó el mejor comportamiento con un porcentaje de adherencia a la superficie de 17,0% sin diferencias significativas con el control positivo Rhapsody® (20,4%); la suspensión bacteriana y la mezcla agua presentaron % de adherencia de 5,3% y 4,5% respectivamente -- Esto comparado a los controles químicos Bravonil® y Dithane® que presentaron porcentajes de adherencia de 83,7% y 80,4%Ítem Evaluación de la promoción de crecimiento de bacillus subtilis ea-cb0575 en cultivos de banano, crisantemo y café(Universidad EAFIT, 2014) Cuéllar Gaviria, Tatiana Zazini; Posada Uribe, Luisa Fernanda; Villegas Escobar, ValeskaEl desarrollo de productos biológicos con base en microorganismos benéficos para la agricultura no es un tema nuevo, sin embargo diversas estrategias para su aplicación y ampliación de su espectro de acción son ampliamente exploradas hoy en día, con el fin de lograr un mejor entendimiento de las condiciones que más beneficien su aplicación -- En este trabajo se evaluó el efecto de la inoculación de un bioinsumo con base en el Bacillus subtilis EA-CB0575 sobre la promoción del crecimiento en cultivos de banano, crisantemo y café -- Para la evaluación en el cultivo de banano, se realizó la inoculación del producto a nivel de raíz en plantas a partir de tres etapas fenológicas -- Los resultados de la evaluación mostraron que al inocular el producto desde la etapa de endurecimiento, hubo un aumento en las variables de longitud aérea (16%-31%), diámetro del pseudotallo (17%), número de hojas (19%-38%), peso seco aéreo (85%) y peso seco total (59%) durante las etapas tempranas del desarrollo -- Sin embargo, al evaluar estas plantas en etapa reproductiva, no se encontraron diferencias estadísticas entre los tratamientos -- Respecto a las plantas inoculadas en las etapas más avanzadas del desarrollo, no se identificaron diferencias significativas entre los tratamientos -- Por otra parte, al evaluar el efecto de la inoculación del bioinsumo en el cultivo de crisantemo se observó que al aplicar el bioformulado sobre esquejes hormonados con AIB hubo un aumento en el peso fresco radicular (27%-64%) cuando se aplicó el producto por medio de la inmersión de los esquejes; mientras que al inocular la suspensión del B. subtilis EA-CB0575 sobre el sustrato de germinación en esquejes no hormonados, se observó una disminución significativa en los tiempos de floración -- Por último, al evaluar el efecto de la inoculación de semillas de café con el bioformulado, se encontró que bajo las condiciones evaluadas, el producto no tuvo un efecto positivo en el crecimiento de las plantas a pesar de haber causado un cambio en la estructura radicular, en donde se observó que las plantas inoculadas con el producto aumentando en un 53% en el diámetro de la raíz principalÍtem Evaluación del efecto de Bacillus subtilis EA-CB0575 en la promoción de crecimiento de Zea mays y Solanum lycopersicum a nivel de invernadero(Universidad EAFIT, 2016) Pulido Jiménez, Ana Carolina; Posada Uribe, Luisa FernandaLas bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR) se han descrito como una alternativa para mitigar los problemas asociados al uso de fertilizantes y pesticidas químicos en la agricultura gracias a su capacidad para favorecer la nutrición y salud de las plantas mediante una amplia gama de mecanismos directos e indirectos -- Sin embargo, previo a su inoculación a los cultivos se hace necesario determinar la concentración y estructura bacteriana eficiente -- El presente trabajo evaluó el efecto de la aplicación de esporas y células vegetativas del microorganismo Bacillus subtilis EA-CB0575 en diferentes concentraciones (107 y 108 UFC/mL), el sobrenadante libre de células proveniente de los cultivos de esporas y células vegetativas, en cultivos de maíz y tomate, mediante las variables respuesta: longitud aérea (LA), peso seco aéreo (PSA), peso seco radicular (PSR) y peso seco total (PST) -- Se encontró que la inoculación del microrganismo, ya sea como esporas o células vegetativas, en ambas concentraciones evaluadas y el sobrenadante proveniente de su cultivo incrementa el crecimiento y desarrollo de las plantas de maíz y tomate respecto al control absoluto sin inocular -- Adicionalmente, se estudiaron los compuestos reportados para la promoción de crecimiento presente en dicho sobrenadante libre de células mediante la identificación preliminar de los metabolitos por HPLC en fase reversa y la cuantificación de las áreas de los picos observados en los cromatogramas obtenidos, se evidenció la posible presencia de fengicinas y surfactina -- Además el rendimiento y la producción de estos metabolitos es mayor cuando el microorganismo está en estado vegetativoÍtem Fengycin C produced by Bacillus subtilis EA-CB0015(American Chemical Society, 2014) Ceballos, Isabel; J. Mira, John; Argel, Luz Edith; Orduz Peralta, Sergio; Romero Tabarez, Magally; Villegas Escobar, Valeska; Centro de Investigaciones del Banano; Instituto de Biotecnología, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá; Universidad Nacional de Colombia, Medellín; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Valeska Villegas Escobar ( vvilleg2@eafit.edu.co.); Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Bacillus subtilis EA-CB0015 was isolated from the phyllosphere of a banana plant and tested for its potential to produce bioactive compounds against Mycosphaerella fijiensis -- Using a dual plate culture technique the cell-free supernatant of B. subtilis EA-CB0015 produced inhibition values of 89 ± 1% -- The active compounds were purified by solid-phase extraction and HPLC, and their primary structures determined using mass spectrometry and amino acid analysis -- A new fengycin isoform, fengycin C, with the amino acid sequence Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Val-Pro-Gln-Thr-Ile was isolated -- The peptidic moiety differs from fengycin B at position 9 and from fengycin A at positions 6 and 9 -- The β-hydroxy fatty acyl chain is connected to the N-terminal of the decapeptide and can be saturated or unsaturated, ranging from 14 to 18 carbons -- The C-terminal residue of the peptidic moiety is linked to the tyrosine residue at position 3, forming the branching point of the acyl peptide and the eight-membered cyclic lactoneÍtem Fengycin C produced by Bacillus subtilis EA-CB0015.(AMER CHEMICAL SOC, 2013-04-26) Villegas-Escobar, Valeska; Ceballos, Isabel; Mira, John J.; Edith Argel, Luz; Orduz Peralta, Sergio; Romero-Tabarez, Magally; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)Bacillus subtilis EA-CB0015 was isolated from the phyllosphere of a banana plant and tested for its potential to produce bioactive compounds against Mycosphaerella fijiensis. Using a dual plate culture technique the cell-free supernatant of B. subtilis EA-CB0015 produced inhibition values of 89 +/- 1%. The active compounds were purified by solid-phase extraction and HPLC, and their primary structures determined using mass spectrometry and amino acid analysis. A new fengycin isoform, fengycin C, with the amino acid sequence Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Val-Pro-Gln-Thr-Ile was isolated. The peptidic moiety differs from fengycin B at position 9 and from fengycin A at positions 6 and 9. The beta-hydroxy fatty acyl chain is connected to the N-terminal of the decapeptide and can be saturated or unsaturated, ranging from 14 to 18 carbons. The C-terminal residue of the peptidic moiety is linked to the tyrosine residue at position 3, forming the branching point of the acyl peptide and the eight-membered cyclic lactone.Ítem Multiple response optimization of Bacillus subtilis EA-CB0015 culture and identification of antifungal metabolites(Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2014) Ordúz, Sergio; Mosquera, Sandra; González Jaramillo, Lina María; Villegas Escobar, Valeska; Escuela de Biociencias; Centro de Investigaciones del Banano; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Valeska Villegas-Escobar (vvilleg2@eafit.edu.co); Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)The low yields of biomass and antimicrobial metabolites obtained in fermentation processes are limiting factors for implementing biological control agents in the field -- In this context, optimization of the culture medium for the biological control agent Bacillus subtilis EA-CB0015 was conducted in submerged culture to maximize the biomass production and antifungal activity -- Additionally, the active metabolites against the phytopathogen Mycosphaerella fijiensis produced under optimized conditions were identified -- Carbon and nitrogen constituents of the culture medium were optimized using a 22 factorial design with central point followed by a multiple response optimization coupled to the desirability function approach -- The optimized medium (33.4 g/L of glucose and 32.5 g/L of yeast extract), showed significant increases in both, cell density by 3.6 folds (13.271.0 g/L) and antifungal activity by 1.2 folds (77.770.3% inhibition) -- To gain insight into the type of active compounds, they were purified and identified by mass spectrometry (MS) -- The MS analysis revealed the presence of three families of lipopeptides: surfactin, fengycin and iturin -- The high antifungal activity was associated with the novel fengycin C and with iturin -- A which were partially growth-associated with a maximum concentration of 781.4 and 355.4 mg/L at 36 h of growth, respectively -- These results indicate the potential of B. subtilis EA-CB0015 to produce high concentrations of biomass and lipopeptides that can be exploited for biotechnological applicationÍtem Multiple response optimization of Bacillus subtilis EA-CB0015 culture and identification of antifungal metabolites(Elsevier Ltd, 2014-01-01) Mosquera, S.; González-Jaramillo, L.M.; Orduz, S.; Villegas-Escobar, V.; Universidad EAFIT. Departamento de Ciencias; Ciencias Biológicas y Bioprocesos (CIBIOP)The low yields of biomass and antimicrobial metabolites obtained in fermentation processes are limiting factors for implementing biological control agents in the field. In this context, optimization of the culture medium for the biological control agent Bacillus subtilis EA-CB0015 was conducted in submerged culture to maximize the biomass production and antifungal activity. Additionally, the active metabolites against the phytopathogen Mycosphaerella fijiensis produced under optimized conditions were identified. Carbon and nitrogen constituents of the culture medium were optimized using a 22 factorial design with central point followed by a multiple response optimization coupled to the desirability function approach. The optimized medium (33.4g/L of glucose and 32.5g/L of yeast extract), showed significant increases in both, cell density by 3.6 folds (13.2±1.0g/L) and antifungal activity by 1.2 folds (77.7±0.3% inhibition). To gain insight into the type of active compounds, they were purified and identified by mass spectrometry (MS). The MS analysis revealed the presence of three families of lipopeptides: surfactin, fengycin and iturin. The high antifungal activity was associated with the novel fengycin C and with iturin A which were partially growth-associated with a maximum concentration of 781.4 and 355.4mg/L at 36h of growth, respectively. These results indicate the potential of B. subtilis EA-CB0015 to produce high concentrations of biomass and lipopeptides that can be exploited for biotechnological application. © 2014 Elsevier Ltd.Ítem Optimización del proceso de producción de un bioinoculante con base en Bacillus Subtilis EA-CB0575(Universidad EAFIT, 2016) Montoya Giraldo, Yessica Alejandra; Moncada Ossa, Ruth Natalia; Posada Uribe, Luisa FernandaCon el fin de reducir los efectos negativos generados por el uso de productos químicos en la agricultura, se han desarrollado insumos biológicos como el planteado por la Universidad EAFIT y AUGURA (Asociación de Bananeros de Colombia), un bioinoculante cuyo ingrediente activo es la cepa Bacillus subtilis EA-CB0575 aislada en el Urabá Antioqueño -- Para estandarizar las etapas de producción de este producto se realizó un protocolo para detallar la etapa de granulación -- Adicionalmente, se optimizaron las condiciones de operación de la mezcladora y el secador, mediante el uso de diseños estadísticos de superficie de respuesta (CCD y Box-Behnken) -- Los valores óptimos hallados para la mezcladora fueron 133 rpm como velocidad de mezclado y 46 minutos en el tiempo de mezclado; mientras que para el secador fue una velocidad de 2.03 m/s, un tiempo de secado de 33 minutos y una temperatura de 46.2°C -- Estos valores se validaron con dos réplicas en diferentes tiempos teniendo como porcentaje de error 11% y 4.35%, respectivamente -- Finalmente, se midieron cuatro propiedades fisicoquímicas del producto optimizado, siguiendo las metodologías planteadas en las Normas Técnicas Colombianas (NTC 439, 5527) y las especificaciones de la resolución 698 (2011) determinadas por el ICA -- Como resultados se obtuvo un producto que cumple con los criterios de aceptación de dichas propiedades, teniendo una humectabilidad de 1 segundo, una suspensibilidad de 95.14%, un pH de 8.345 y una estabilidad de la bacteria con un porcentaje de error del 0.042% entre los valores de viabilidad logrados en cada mes de evaluación (16 meses en total), teniendo una viabilidad promedio de 9.422 Log(UFC/g) -- Con estos resultados el proceso de producción es promisorio para su comercialización